産品描述
PreScission Protease是一種由人(rén)鼻病毒14型的3C蛋白酶（human rhinovirus (HRV) type 14 3C protease）和(hé)GST組成的融合蛋白。該蛋白酶可(kě)在低(dī)溫下（4°C）特異識别短(duǎn)肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和(hé)Gly氨基酸殘基之間(jiān)進行(xíng)酶切。底物的識别和(hé)切割不僅依賴于融合蛋白的一級結構還(hái)依賴于融合蛋白的二級和(hé)三級結構。它可(kě)以特異性的将pGEX-6P系列等載體(tǐ)表達出的帶有(yǒu)酶底物識别多(duō)肽序列融合蛋白的GST标簽進行(xíng)分離。本品由大(dà)腸杆菌中重組表達，以無菌液體(tǐ)形式提供。 産品性質
中文别名（Chinese Synonym）
重組Prescission蛋白酶
英文别名（English Synonym）
3C protease，Picornain 3C，PSP
來(lái)源（Source）
大(dà)腸杆菌表達
分子量（Molecular Weight）
約46kDa
物理(lǐ)外觀（Physical Appearance）
無菌無色液體(tǐ)
儲存緩沖液（Storage Buffer）
25mM Tris-HCl（pH8.0），150mM NaCl，1mM EDTA，5mM DTT，50%（V/V）Glycerin
10×酶切緩沖液（10×Cleavage Buffer）
500mM Tris-HCl（pH7.0），1.5M NaCl，10mM EDTA，10mM DTT
純度（Purity）
經SDS-PAGE及HPLC分析，純度> 95%
酶活定義（Unit Definition）
在5℃條件下反應16小(xiǎo)時(shí)，能夠切割10µg的GST标簽的融合蛋白達90%以上(shàng)所需的酶量定義為(wèi)一個(gè)活性單位
運輸和(hé)保存方法
幹冰運輸。-80℃長期儲存，有(yǒu)效期2年；小(xiǎo)量分裝-20℃保存，有(yǒu)效期6個(gè)月；
注意事項
1）100mM ZnCl2、4mM AEBSF和(hé)100μM Chymostatin将抑制(zhì)PreScission Protease 50%以上(shàng)酶活性；
2）配制(zhì)好的10×Cleavage Buffer置于-20°C保存。避免反複凍融！
3）為(wèi)了您的安全和(hé)健康，請(qǐng)穿實驗服并戴一次性手套操作(zuò)。
4）本産品僅作(zuò)科研用途！
使用方法
工作(zuò)液濃度應根據具體(tǐ)實驗确定，建議進行(xíng)預實驗摸索最佳實驗濃度。
1）初始條件摸索a. 按照下表設置酶切反應體(tǐ)系：
反應物組成 體(tǐ)積
GST融合蛋白 100μg
Prescission Protease 2μL（1U/μL）
10×Cleavage Buffer 10μL
ddH2O 至100μL
b. 将反應混合物置于4℃反應15-16h；
c. 取20μL樣品進行(xíng)SDS-PAGE電(diàn)泳分析，根據結果，優化反應所需的最适酶量，重複步驟；
d. 在實際操作(zuò)中，建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。
2）柱上(shàng)酶切GST标簽蛋白（以10mg GST标簽蛋白/mL凝膠為(wèi)例）
a. 4℃條件下，使用10倍柱體(tǐ)積酶切緩沖液洗滌已結合GST标簽蛋白的純化柱，并去除殘留緩沖液；
b. 準備PreScission Protease：約每100μg GST标簽蛋白使用2U PreScission Protease (或按照經步驟1優化後的條件)。對于10mg GST标簽蛋白需使用200U PreScission Protease，用PreScission酶切緩沖液稀釋至與凝膠柱相同的體(tǐ)積，即1mL。
c. 将稀釋好的1mL PreScission Protease泵入純化柱中，4°C保持4-8h（為(wèi)确保酶切完全，可(kě)以4°C酶切過夜）。如果蛋白結合是在離心管中進行(xíng)的，可(kě)将準備好的PreScission Protease直接加入離心管中，4°C在搖床上(shàng)緩慢搖動4-8小(xiǎo)時(shí)（為(wèi)确保酶切完全，可(kě)以4°C酶切過夜）。
d. 用1倍柱床體(tǐ)積的PreScission Protease酶切緩沖液洗滌，重複三次，分别收集每次的洗滌液。如果酶切反應是在離心管中進行(xíng)的，1000g離心2分鍾，收集上(shàng)清，然後加入1mL酶切緩沖液重懸沉澱，離心(1000g×2min)收集上(shàng)清，接着再加入1mL酶切緩沖液重懸沉澱，離心(1000g×2min)收集上(shàng)清。洗脫組分中含有(yǒu)切除了GST标簽的目的蛋白，而GST标簽和(hé)帶有(yǒu)GST标簽的PreScission Protease則仍然結合在凝膠柱上(shàng)。
3）柱下酶切GST标簽蛋白（以10mg GST标簽蛋白/mL凝膠為(wèi)例）
a. 使用脫鹽柱快速除去洗脫組分中的GSH、咪唑等特殊組分，或用PreScission Protease酶切緩沖液進行(xíng)透析。
b. 按每100μg标簽蛋白加入2U PreScission Protease的比例加入蛋白酶，4°C孵育4-8h或者過夜。
c. 将酶切後的蛋白樣品加入預先用PreScission Protease酶切緩沖液平衡好的GSTSep Glutathione Agarose Resin（Cat#20507ES），室溫結合20-30分鍾。
d. 500g離心5分鍾，收集上(shàng)清，其中含有(yǒu)切除了标簽的目的蛋白，PreScission Protease則結合在凝膠沉澱中。如果目的蛋白是GST标簽蛋白，那(nà)麽殘留的沒有(yǒu)被酶切的GST标簽蛋白、PreScission Protease和(hé)酶切下來(lái)的GST标簽則結合在凝膠沉澱中，切除了标簽的目的蛋白在溶液中。
PreScission Protease是一種由人(rén)鼻病毒14型的3C蛋白酶（human rhinovirus (HRV) type 14 3C protease）和(hé)GST組成的融合蛋白。該蛋白酶可(kě)在低(dī)溫下（4°C）特異識别短(duǎn)肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和(hé)Gly氨基酸殘基之間(jiān)進行(xíng)酶切。底物的識别和(hé)切割不僅依賴于融合蛋白的一級結構還(hái)依賴于融合蛋白的二級和(hé)三級結構。它可(kě)以特異性的将pGEX-6P系列等載體(tǐ)表達出的帶有(yǒu)酶底物識别多(duō)肽序列融合蛋白的GST标簽進行(xíng)分離。本品由大(dà)腸杆菌中重組表達，以無菌液體(tǐ)形式提供。 産品性質
中文别名（Chinese Synonym）
重組Prescission蛋白酶
英文别名（English Synonym）
3C protease，Picornain 3C，PSP
來(lái)源（Source）
大(dà)腸杆菌表達
分子量（Molecular Weight）
約46kDa
物理(lǐ)外觀（Physical Appearance）
無菌無色液體(tǐ)
儲存緩沖液（Storage Buffer）
25mM Tris-HCl（pH8.0），150mM NaCl，1mM EDTA，5mM DTT，50%（V/V）Glycerin
10×酶切緩沖液（10×Cleavage Buffer）
500mM Tris-HCl（pH7.0），1.5M NaCl，10mM EDTA，10mM DTT
純度（Purity）
經SDS-PAGE及HPLC分析，純度> 95%
酶活定義（Unit Definition）
在5℃條件下反應16小(xiǎo)時(shí)，能夠切割10µg的GST标簽的融合蛋白達90%以上(shàng)所需的酶量定義為(wèi)一個(gè)活性單位
運輸和(hé)保存方法
幹冰運輸。-80℃長期儲存，有(yǒu)效期2年；小(xiǎo)量分裝-20℃保存，有(yǒu)效期6個(gè)月；
注意事項
1）100mM ZnCl2、4mM AEBSF和(hé)100μM Chymostatin将抑制(zhì)PreScission Protease 50%以上(shàng)酶活性；
2）配制(zhì)好的10×Cleavage Buffer置于-20°C保存。避免反複凍融！
3）為(wèi)了您的安全和(hé)健康，請(qǐng)穿實驗服并戴一次性手套操作(zuò)。
4）本産品僅作(zuò)科研用途！
使用方法
工作(zuò)液濃度應根據具體(tǐ)實驗确定，建議進行(xíng)預實驗摸索最佳實驗濃度。
1）初始條件摸索a. 按照下表設置酶切反應體(tǐ)系：
反應物組成 體(tǐ)積
GST融合蛋白 100μg
Prescission Protease 2μL（1U/μL）
10×Cleavage Buffer 10μL
ddH2O 至100μL
b. 将反應混合物置于4℃反應15-16h；
c. 取20μL樣品進行(xíng)SDS-PAGE電(diàn)泳分析，根據結果，優化反應所需的最适酶量，重複步驟；
d. 在實際操作(zuò)中，建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。
2）柱上(shàng)酶切GST标簽蛋白（以10mg GST标簽蛋白/mL凝膠為(wèi)例）
a. 4℃條件下，使用10倍柱體(tǐ)積酶切緩沖液洗滌已結合GST标簽蛋白的純化柱，并去除殘留緩沖液；
b. 準備PreScission Protease：約每100μg GST标簽蛋白使用2U PreScission Protease (或按照經步驟1優化後的條件)。對于10mg GST标簽蛋白需使用200U PreScission Protease，用PreScission酶切緩沖液稀釋至與凝膠柱相同的體(tǐ)積，即1mL。
c. 将稀釋好的1mL PreScission Protease泵入純化柱中，4°C保持4-8h（為(wèi)确保酶切完全，可(kě)以4°C酶切過夜）。如果蛋白結合是在離心管中進行(xíng)的，可(kě)将準備好的PreScission Protease直接加入離心管中，4°C在搖床上(shàng)緩慢搖動4-8小(xiǎo)時(shí)（為(wèi)确保酶切完全，可(kě)以4°C酶切過夜）。
d. 用1倍柱床體(tǐ)積的PreScission Protease酶切緩沖液洗滌，重複三次，分别收集每次的洗滌液。如果酶切反應是在離心管中進行(xíng)的，1000g離心2分鍾，收集上(shàng)清，然後加入1mL酶切緩沖液重懸沉澱，離心(1000g×2min)收集上(shàng)清，接着再加入1mL酶切緩沖液重懸沉澱，離心(1000g×2min)收集上(shàng)清。洗脫組分中含有(yǒu)切除了GST标簽的目的蛋白，而GST标簽和(hé)帶有(yǒu)GST标簽的PreScission Protease則仍然結合在凝膠柱上(shàng)。
3）柱下酶切GST标簽蛋白（以10mg GST标簽蛋白/mL凝膠為(wèi)例）
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通(tōng)用銷售條款
一． 買方對産品的使用：産品應當用于實驗室研究目的，不可(kě)用作(zuò)其他用途（包括但(dàn)不限于：體(tǐ)外診斷、食品、藥物、醫(yī)療器(qì)械、人(rén)用或獸用治療、化妝品或其他商業用途）。購買方應明(míng)确清楚知道(dào)此聲明(míng)，并嚴格遵守。如有(yǒu)任何因購買方隐瞞真實購買意圖，由此引起的法律責任以及一切法律後果，由購買方承擔。
二． 準确訂貨：下訂單時(shí)，買方應預先仔細審閱産品的技(jì)術(shù)指标，确認無誤。不詳之處應立即查詢。訂單及産品一經發出，即視(shì)為(wèi)買方認可(kě)有(yǒu)關産品的技(jì)術(shù)指标。
三． 質量責任：我司保證所供産品質量與随貨COA所列标準相符。買方應以産品制(zhì)造商的标準作(zuò)為(wèi)驗收标準。鑒于化學品的特殊性，賣方對未使用之前的産品質量負責，對化學品的應用不負有(yǒu)任何直接與間(jiān)接的責任。賣方提醒買方：在做(zuò)實驗之前，預先按照技(jì)術(shù)規範檢驗産品質量。在産品開(kāi)始使用之後，買方對應用及其結果負有(yǒu)全部責任。若有(yǒu)質量異議，買方需在收到貨物後10個(gè)工作(zuò)日內(nèi)書(shū)面通(tōng)知賣方，過期無效。
四． 有(yǒu)限保證：在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方提供的産品均“按現狀條件”提供給買方，賣方不作(zuò)對産品和(hé)/或其使用的各種明(míng)示或默示的保證（包括但(dàn)不限于對适銷性、适合用于特殊用途及不侵權的所有(yǒu)明(míng)示或默示保證）或賣方産品會(huì)達到任何特定結果或不會(huì)被中斷或不會(huì)有(yǒu)錯誤的保證。
五． 責任限制(zhì)：在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方不對以任何方式由本合同、賣方産品或使用賣方産品引起的或與此有(yǒu)關的任何利潤或收入損失或其他後果性損失、随附性損失、特殊損失、懲罰性損失或任何其他間(jiān)接損失或損害承擔責任。在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方的最高(gāo)賠償限額為(wèi)買方就所涉及的賣方産品實際支付給賣方的價格。
六． 如賣方因不可(kě)抗拒力原因無法供貨，賣方将及時(shí)通(tōng)知買方，雙方将視(shì)情況決定部分不履行(xíng)、全部不履行(xíng)或延期履行(xíng)；如供貨期限屆滿日為(wèi)國內(nèi)外重大(dà)節日或國家(jiā)法定假日，則供貨期限順延；若因缺貨導緻延期交貨或無法供貨，賣方将及時(shí)告知買方，并不視(shì)為(wèi)賣方違約。不可(kě)抗力：因火(huǒ)災、洪水(shuǐ)、風暴、爆炸、恐怖事件、戰争、政府行(xíng)為(wèi)或任何其他賣方無法預見、無法避免和(hé)無法克服的事件造成延期交貨或無法交貨的，賣方不承擔任何責任。
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（2）常規試劑采用快遞，運費以顯示為(wèi)準。
（3）大(dà)物件一般默認發德邦物流，運費需聯系客服計(jì)算(suàn)。
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二． 準确訂貨：下訂單時(shí)，買方應預先仔細審閱産品的技(jì)術(shù)指标，确認無誤。不詳之處應立即查詢。訂單及産品一經發出，即視(shì)為(wèi)買方認可(kě)有(yǒu)關産品的技(jì)術(shù)指标。
三． 質量責任：我司保證所供産品質量與随貨COA所列标準相符。買方應以産品制(zhì)造商的标準作(zuò)為(wèi)驗收标準。鑒于化學品的特殊性，賣方對未使用之前的産品質量負責，對化學品的應用不負有(yǒu)任何直接與間(jiān)接的責任。賣方提醒買方：在做(zuò)實驗之前，預先按照技(jì)術(shù)規範檢驗産品質量。在産品開(kāi)始使用之後，買方對應用及其結果負有(yǒu)全部責任。若有(yǒu)質量異議，買方需在收到貨物後10個(gè)工作(zuò)日內(nèi)書(shū)面通(tōng)知賣方，過期無效。
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五． 責任限制(zhì)：在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方不對以任何方式由本合同、賣方産品或使用賣方産品引起的或與此有(yǒu)關的任何利潤或收入損失或其他後果性損失、随附性損失、特殊損失、懲罰性損失或任何其他間(jiān)接損失或損害承擔責任。在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方的最高(gāo)賠償限額為(wèi)買方就所涉及的賣方産品實際支付給賣方的價格。
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（1）生(shēng)物試劑需要冷凍運輸，運輸需要泡沫盒和(hé)一定量的冰袋（特殊商品需要幹冰），運費金額會(huì)開(kāi)進發票(piào)裏。運費以顯示為(wèi)準
（2）常規試劑采用快遞，運費以顯示為(wèi)準。
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