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Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大(dà)腸杆菌表達重組腸激酶(不帶标簽)
Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大(dà)腸杆菌表達重組腸激酶(不帶标簽)
中文名稱: Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大(dà)腸杆菌表達重組腸激酶(不帶标簽) 
英文名稱: Enterokinase,Recombinant,Expressed in E.coli大(dà)腸杆菌表達重組腸激酶(不帶标簽) 
分子式:   分子量:  
CAS号: EINECS編号:  
儲存條件: 見産品介紹 
中文别名:  
是否危險: 否 
産品簡介
重組腸激酶(rEK)是一種高(gāo)純度的重組牛腸激酶輕鏈片段,氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一緻,有(yǒu)着和(hé)天然提取的腸激酶同樣特異的酶切位點,切割位點Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,可(kě)去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标簽,同時(shí)重組腸激酶(rEK)具有(yǒu)比天然酶更高(gāo)的切割活性。
重組腸激酶為(wèi)采用重組大(dà)腸杆菌分泌表達的高(gāo)純度、高(gāo)活性、高(gāo)特異的牛腸激酶,不含其他蛋白酶,可(kě)以在較寬pH範圍(4.5-9.5)和(hé)較寬溫度範圍內(nèi)有(yǒu)效切割融合蛋白,并且在各種去垢劑和(hé)變性劑存在的條件下仍具有(yǒu)部分活性。本品不含标簽,由于具有(yǒu)極高(gāo)酶切活性,酶切反應使用量少(shǎo),不影(yǐng)響下遊蛋白應用,可(kě)不考慮除去。
産品信息
規格
100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U
産品性質
來(lái)源(Source)
大(dà)腸杆菌表達
分子量(Molecular Weight)
理(lǐ)論值25.85 kDa
外觀(Appearance)
澄清、無色至淡黃色液體(tǐ)
酶濃度(Enzyme Concentration)
≥5 U/uL
活性定義(Activity Definition)
一個(gè)活性單位定義為(wèi)25°C,12-16 h,在25 mM Tris-HCl,Ph 8.0緩沖體(tǐ)系下,将500 μg帶有(yǒu)腸激酶酶切位點的融合蛋白切開(kāi)95%所需要的酶量
內(nèi)毒素檢測(Endotoxin)
用LAL法測定內(nèi)毒素含量小(xiǎo)于1 EU/μg
質量保證(Quality assurance)
經多(duō)次柱純化,SDS-PAGE膠檢測僅可(kě)見清晰單一的目的條帶;不含其他蛋白酶,無非特異性切割
緩沖體(tǐ)系(Buffer)
50 mM Tris-HCl,pH8.0,250 mM NaCl,2 mM Ca 2+,50%甘油
儲存條件
-25~-15℃保存,有(yǒu)效期2年。盡量避免反複凍融(5次以內(nèi),無活性損失)
使用方法(應用舉例)
【注】該酶效力高(gāo)且待切蛋白結構性質不同,建議先進行(xíng)預實驗摸索酶使用濃度及酶切反應時(shí)間(jiān)。 1)反應體(tǐ)系
融合蛋白 0.05-0.1 mg(蛋白濃度:0.1-1 mg/mL)
Enterokinase 0.1-0.2 U
緩沖體(tǐ)系 25 mM Tris-HCL 8.0
2)反應條件:25°C過夜酶切(注:完全酶切需要16-24 h)。
【注】重組腸激酶可(kě)使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀釋成每1 μL含0.1 U的溶液使用。
4°C低(dī)溫酶切條件:4°C能對底物進行(xíng)有(yǒu)效酶切,但(dàn)需要延長酶切時(shí)間(jiān)至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。
注意事項
1.本産品所講述的緩沖體(tǐ)系需要自行(xíng)配置。
2.不建議37℃條件下酶切,可(kě)能會(huì)有(yǒu)非特異性酶切出現。
3.在>200 mM咪唑,或>200 mM NaCl,或>5%甘油,酶切會(huì)受到影(yǐng)響。如果樣品溶液中含有(yǒu)上(shàng)述成分的一種或多(duō)種,為(wèi)獲得(de)理(lǐ)想的酶切結果,請(qǐng)先将樣品透析到25 mM Tris-HCl 8.0緩沖液中,然後再進行(xíng)酶切實驗;若不方便透析,可(kě)将樣品稀釋到咪唑含量在100 mM以下,NaCl濃度在50 mM以下,甘油濃度小(xiǎo)于5%以下進行(xíng)酶切,酶的用量與蛋白比例不變;若幹擾因素很(hěn)多(duō),且不便去除,需要适當增加酶量或延長酶切時(shí)間(jiān),有(yǒu)助于得(de)到理(lǐ)想的酶切效果。
4.磷酸鹽對Enterokinase有(yǒu)很(hěn)強的抑制(zhì)作(zuò)用,痕量的磷酸鹽都會(huì)嚴重影(yǐng)響Enterokinase的活性,因此在酶切體(tǐ)系內(nèi)不能存在磷酸鹽。
5.本品是具有(yǒu)高(gāo)酶活力重組腸激酶,切割蛋白使用量少(shǎo),可(kě)不考慮除去。後續如需去除重組腸激酶,可(kě)用陰離子交換樹(shù)脂(如DEAE-FF)對其進行(xíng)洗脫。推薦洗脫條件如下: 平衡緩沖液:25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脫緩沖液:25 mM Tris-HCl pH 8.0,含100 mM NaCl
6. 蛋白酶切效果不好,可(kě)适當增加酶量,或适當延長酶切時(shí)間(jiān)。
7. 本産品僅作(zuò)科研用途。
8. 為(wèi)了您的安全和(hé)健康,請(qǐng)穿實驗服并佩戴一次性手套操作(zuò)。
COA搜索:
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通(tōng)用銷售條款
 一. 買方對産品的使用:産品應當用于實驗室研究目的,不可(kě)用作(zuò)其他用途(包括但(dàn)不限于:體(tǐ)外診斷、食品、藥物、醫(yī)療器(qì)械、人(rén)用或獸用治療、化妝品或其他商業用途)。購買方應明(míng)确清楚知道(dào)此聲明(míng),并嚴格遵守。如有(yǒu)任何因購買方隐瞞真實購買意圖,由此引起的法律責任以及一切法律後果,由購買方承擔。
二. 準确訂貨:下訂單時(shí),買方應預先仔細審閱産品的技(jì)術(shù)指标,确認無誤。不詳之處應立即查詢。訂單及産品一經發出,即視(shì)為(wèi)買方認可(kě)有(yǒu)關産品的技(jì)術(shù)指标。
三. 質量責任:我司保證所供産品質量與随貨COA所列标準相符。買方應以産品制(zhì)造商的标準作(zuò)為(wèi)驗收标準。鑒于化學品的特殊性,賣方對未使用之前的産品質量負責,對化學品的應用不負有(yǒu)任何直接與間(jiān)接的責任。賣方提醒買方:在做(zuò)實驗之前,預先按照技(jì)術(shù)規範檢驗産品質量。在産品開(kāi)始使用之後,買方對應用及其結果負有(yǒu)全部責任。若有(yǒu)質量異議,買方需在收到貨物後10個(gè)工作(zuò)日內(nèi)書(shū)面通(tōng)知賣方,過期無效。
四. 有(yǒu)限保證:在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi),賣方提供的産品均“按現狀條件”提供給買方,賣方不作(zuò)對産品和(hé)/或其使用的各種明(míng)示或默示的保證(包括但(dàn)不限于對适銷性、适合用于特殊用途及不侵權的所有(yǒu)明(míng)示或默示保證)或賣方産品會(huì)達到任何特定結果或不會(huì)被中斷或不會(huì)有(yǒu)錯誤的保證。
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六. 如賣方因不可(kě)抗拒力原因無法供貨,賣方将及時(shí)通(tōng)知買方,雙方将視(shì)情況決定部分不履行(xíng)、全部不履行(xíng)或延期履行(xíng);如供貨期限屆滿日為(wèi)國內(nèi)外重大(dà)節日或國家(jiā)法定假日,則供貨期限順延;若因缺貨導緻延期交貨或無法供貨,賣方将及時(shí)告知買方,并不視(shì)為(wèi)賣方違約。不可(kě)抗力:因火(huǒ)災、洪水(shuǐ)、風暴、爆炸、恐怖事件、戰争、政府行(xíng)為(wèi)或任何其他賣方無法預見、無法避免和(hé)無法克服的事件造成延期交貨或無法交貨的,賣方不承擔任何責任。

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