産品描述
天然蛋白 L（Protein L）是從馬格努斯消化鏈球菌分離出來(lái)的能和(hé)免疫球蛋白特異性結合的蛋白質，分子量為(wèi) 36 KD。本産品使用的是基因改造後的蛋白 L ，既保留了與抗體(tǐ) k 鏈結合的特性，同時(shí)也不會(huì)影(yǐng)響抗體(tǐ)的抗原結合位點。與 protein A 和(hé) Protein G 相比，Protein L 更能廣泛地結合各種來(lái)源及亞類的抗體(tǐ)，包括人(rén)、小(xiǎo)鼠、大(dà)鼠、兔和(hé)雞，但(dàn)不結合牛、山(shān)羊或綿羊來(lái)源的免疫球蛋白。Protein L瓊脂糖凝膠是用于分離和(hé)純化單克隆抗體(tǐ)的通(tōng)用性親和(hé)層析介質，本産品以高(gāo)度交聯的瓊脂糖凝膠為(wèi)基質，重組 Protein L 為(wèi)配基，具有(yǒu)很(hěn)高(gāo)的物理(lǐ)化學穩定性，可(kě)以在相對較高(gāo)的流速下進行(xíng)抗體(tǐ)的純化，适用于工業客戶。利用本産品經過一步親和(hé)層析，可(kě)從腹水(shuǐ)、血清和(hé)培養液等樣品中得(de)到高(gāo)純度的抗體(tǐ)，使用方便，應用廣泛。
産品性質
基質（Matrix） 高(gāo)度交聯的 4%瓊脂糖微球
配體(tǐ)（Ligand） 重組蛋白 L
孔徑（Bead size） 45-165 µm
最大(dà)流速（Flowmax） 0.3 MPa，3 bar
儲存緩沖液（Buffer） 含 20%乙醇的 1×PBS
載量（Capacity） >15 mg Human IgG/mL 基質
pH 範圍（pH range） 3-10
運輸與保存方法 冰袋運輸。4℃保存，2 年有(yǒu)效。
需準備試劑
【注】：建議以下緩沖液在使用前用 0.22 μm 或 0.45 μm 濾膜過濾。
結合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl，20 mM Na2HPO4，pH 7.0
洗脫緩沖液：0.1 M 甘氨酸，pH 3.0
中和(hé)液：1 M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】：上(shàng)柱之前要确保樣品溶液有(yǒu)合适的離子強度和(hé) pH 值，可(kě)以用結合/洗滌緩沖液對血清樣品、腹水(shuǐ)或細胞培養液稀釋， 或者樣品用結合/洗滌緩沖液透析。
1 裝填
1） 用去離子水(shuǐ)沖洗層析柱底篩闆與接頭，确保柱底篩闆上(shàng)無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水(shuǐ)。
2） 将樹(shù)脂懸浮起來(lái)，小(xiǎo)心的将漿液連續地倒入層析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入漿液可(kě)減少(shǎo)氣泡的産生(shēng)。
3） 如果使用儲液器(qì)，應立即在層析柱和(hé)儲液器(qì)中加滿水(shuǐ)，将進樣分配器(qì)放置于漿液表面，連接至泵上(shàng)，避免在分配器(qì)或進樣管中産生(shēng)氣泡。
4） 打開(kāi)層析柱底部出口，開(kāi)起泵，使其在設定的流速下進行(xíng)。最初應讓緩沖液緩慢流過層析柱，然後緩慢增加至最終流速， 這樣可(kě)避免液壓對所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可(kě)以用所使用泵的最大(dà)流速，這樣也可(kě)以得(de)到一個(gè)很(hěn)好的裝填效果。
【注】：在随後的色譜程序中，不要超過最大(dà)裝柱流速的 75%，當柱床高(gāo)度穩定後，在最後的裝柱流速下至少(shǎo)再上(shàng) 3 倍柱床體(tǐ)積的去離子水(shuǐ)。标上(shàng)柱床高(gāo)度。
5） 關閉泵，關閉層析柱出口。
6） 如果使用儲液器(qì)，去除儲液器(qì)，将分配器(qì)至于層析柱中。
7） 将分配器(qì)推向柱子至标記的柱床高(gāo)度處。允許裝柱液進入分配器(qì)，鎖緊分配器(qì)接頭。
8） 将裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統中，開(kāi)始平衡。如果需要可(kě)以重新調整分配器(qì)。
2 樣品純化
1） 平衡：用 5 倍柱體(tǐ)積的結合 Buffer 平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體(tǐ)系下，起到保護蛋白的作(zuò)用。
2） 上(shàng)樣：将樣品加到平衡好的 Protein L Agarose Resin 4FF 中，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸，提高(gāo)目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
3） 洗雜： 用 10-15 倍柱體(tǐ)積的洗雜 Buffer 進行(xíng)清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
4） 洗脫： 使用 5-10 倍柱體(tǐ)積的洗脫 Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。
5） 清洗及保存：依次使用 3 倍柱體(tǐ)積的結合 Buffer 和(hé) 5 倍柱體(tǐ)積的去離子水(shuǐ)平衡填料，最後再用 5 倍柱體(tǐ)積的 20%的乙醇平衡，然後保存在等體(tǐ)積的 20%的乙醇中，置于 4℃保存，防止填料被細菌污染。
3 SDS-PAGE 檢測
将純化過程中得(de)到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用 SDS-PAGE 進行(xíng)檢測，判定其純化效果。
4 樹(shù)脂清洗
随着一些(xiē)變性物質的沉澱和(hé)蛋白的聚集，往往造成流速和(hé)結合載量下降，影(yǐng)響柱子的性能，這時(shí)需對柱子進行(xíng)清洗：
1） 去除沉澱或變性物質
① 用 2 倍柱體(tǐ)積的 6 M 鹽酸胍溶液進行(xíng)清洗；
② 用 5 倍柱體(tǐ)積的 PBS，pH 7.4 清洗。
2） 去除由于疏水(shuǐ)性吸附造成的非特異吸附物質
① 用 3-4 倍柱體(tǐ)積的 70%乙醇或 2 倍柱體(tǐ)積的 1% Triton™X-100 清洗；
② 用 5 倍柱體(tǐ)積的 PBS，pH 7.4 清洗。
注意事項
1） 請(qǐng)勿冷凍保存本産品。
2） Protein L 瓊脂糖珠使用前一定要充分颠倒若幹次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3） 所有(yǒu)操作(zuò)過程中，樣本需要在 4℃或冰上(shàng)操作(zuò)。
4） 為(wèi)了您的安全和(hé)健康，請(qǐng)穿實驗服并戴一次性手套操作(zuò)。
1 裝填
1） 用去離子水(shuǐ)沖洗層析柱底篩闆與接頭，确保柱底篩闆上(shàng)無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水(shuǐ)。
2） 将樹(shù)脂懸浮起來(lái)，小(xiǎo)心的将漿液連續地倒入層析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入漿液可(kě)減少(shǎo)氣泡的産生(shēng)。
3） 如果使用儲液器(qì)，應立即在層析柱和(hé)儲液器(qì)中加滿水(shuǐ)，将進樣分配器(qì)放置于漿液表面，連接至泵上(shàng)，避免在分配器(qì)或進樣管中産生(shēng)氣泡。
4） 打開(kāi)層析柱底部出口，開(kāi)起泵，使其在設定的流速下進行(xíng)。最初應讓緩沖液緩慢流過層析柱，然後緩慢增加至最終流速， 這樣可(kě)避免液壓對所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可(kě)以用所使用泵的最大(dà)流速，這樣也可(kě)以得(de)到一個(gè)很(hěn)好的裝填效果。
【注】：在随後的色譜程序中，不要超過最大(dà)裝柱流速的 75%，當柱床高(gāo)度穩定後，在最後的裝柱流速下至少(shǎo)再上(shàng) 3 倍柱床體(tǐ)積的去離子水(shuǐ)。标上(shàng)柱床高(gāo)度。
5） 關閉泵，關閉層析柱出口。
6） 如果使用儲液器(qì)，去除儲液器(qì)，将分配器(qì)至于層析柱中。
7） 将分配器(qì)推向柱子至标記的柱床高(gāo)度處。允許裝柱液進入分配器(qì)，鎖緊分配器(qì)接頭。
8） 将裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統中，開(kāi)始平衡。如果需要可(kě)以重新調整分配器(qì)。
2 樣品純化
1） 平衡：用 5 倍柱體(tǐ)積的結合 Buffer 平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體(tǐ)系下，起到保護蛋白的作(zuò)用。
2） 上(shàng)樣：将樣品加到平衡好的 Protein L Agarose Resin 4FF 中，保證目的蛋白與樹(shù)脂充分接觸，提高(gāo)目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
3） 洗雜： 用 10-15 倍柱體(tǐ)積的洗雜 Buffer 進行(xíng)清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
4） 洗脫： 使用 5-10 倍柱體(tǐ)積的洗脫 Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。
5） 清洗及保存：依次使用 3 倍柱體(tǐ)積的結合 Buffer 和(hé) 5 倍柱體(tǐ)積的去離子水(shuǐ)平衡填料，最後再用 5 倍柱體(tǐ)積的 20%的乙醇平衡，然後保存在等體(tǐ)積的 20%的乙醇中，置于 4℃保存，防止填料被細菌污染。
3 SDS-PAGE 檢測
将純化過程中得(de)到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用 SDS-PAGE 進行(xíng)檢測，判定其純化效果。
4 樹(shù)脂清洗
随着一些(xiē)變性物質的沉澱和(hé)蛋白的聚集，往往造成流速和(hé)結合載量下降，影(yǐng)響柱子的性能，這時(shí)需對柱子進行(xíng)清洗：
1） 去除沉澱或變性物質
① 用 2 倍柱體(tǐ)積的 6 M 鹽酸胍溶液進行(xíng)清洗；
② 用 5 倍柱體(tǐ)積的 PBS，pH 7.4 清洗。
2） 去除由于疏水(shuǐ)性吸附造成的非特異吸附物質
① 用 3-4 倍柱體(tǐ)積的 70%乙醇或 2 倍柱體(tǐ)積的 1% Triton™X-100 清洗；
② 用 5 倍柱體(tǐ)積的 PBS，pH 7.4 清洗。
注意事項
1） 請(qǐng)勿冷凍保存本産品。
2） Protein L 瓊脂糖珠使用前一定要充分颠倒若幹次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3） 所有(yǒu)操作(zuò)過程中，樣本需要在 4℃或冰上(shàng)操作(zuò)。
4） 為(wèi)了您的安全和(hé)健康，請(qǐng)穿實驗服并戴一次性手套操作(zuò)。
附錄 1 常見問題與解答(dá)
| 問題 | 可(kě)能原因 | 推薦解決方法 |
| 柱子反壓過高(gāo) |
篩闆被堵塞 | 清洗或更換篩闆 |
| 填料被堵塞 |
清洗填料 | |
| 裂解液中含有(yǒu)微笑的固體(tǐ)顆粒，建議上(shàng)柱前使用 0.22 µm/0.45 µm 濾膜過濾。 |
||
| 樣品純化過程中曲線不穩 |
樣品或Buffer 中有(yǒu)氣泡 |
趕出氣泡 |
| 樣品和(hé) Buffer 進行(xíng)脫氣 | ||
| 洗脫組分中沒有(yǒu)目的蛋白 |
樣品中抗體(tǐ)濃度太低(dī) | 使用其抗原做(zuò)配體(tǐ)的介質 |
| 抗體(tǐ)被降解 | 适當的提高(gāo)洗脫 pH | |
| 樣品與Protein L 結合力低(dī) | 換用 Protein G 或 Protein A/G 樹(shù)脂純化 | |
| 回收率逐漸減低(dī) |
上(shàng)樣量太多(duō) | 減少(shǎo)上(shàng)樣量 |
| 柱子太髒，載量降低(dī) | 清洗樹(shù)脂 |
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通(tōng)用銷售條款
一． 買方對産品的使用：産品應當用于實驗室研究目的，不可(kě)用作(zuò)其他用途（包括但(dàn)不限于：體(tǐ)外診斷、食品、藥物、醫(yī)療器(qì)械、人(rén)用或獸用治療、化妝品或其他商業用途）。購買方應明(míng)确清楚知道(dào)此聲明(míng)，并嚴格遵守。如有(yǒu)任何因購買方隐瞞真實購買意圖，由此引起的法律責任以及一切法律後果，由購買方承擔。
二． 準确訂貨：下訂單時(shí)，買方應預先仔細審閱産品的技(jì)術(shù)指标，确認無誤。不詳之處應立即查詢。訂單及産品一經發出，即視(shì)為(wèi)買方認可(kě)有(yǒu)關産品的技(jì)術(shù)指标。
三． 質量責任：我司保證所供産品質量與随貨COA所列标準相符。買方應以産品制(zhì)造商的标準作(zuò)為(wèi)驗收标準。鑒于化學品的特殊性，賣方對未使用之前的産品質量負責，對化學品的應用不負有(yǒu)任何直接與間(jiān)接的責任。賣方提醒買方：在做(zuò)實驗之前，預先按照技(jì)術(shù)規範檢驗産品質量。在産品開(kāi)始使用之後，買方對應用及其結果負有(yǒu)全部責任。若有(yǒu)質量異議，買方需在收到貨物後10個(gè)工作(zuò)日內(nèi)書(shū)面通(tōng)知賣方，過期無效。
四． 有(yǒu)限保證：在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方提供的産品均“按現狀條件”提供給買方，賣方不作(zuò)對産品和(hé)/或其使用的各種明(míng)示或默示的保證（包括但(dàn)不限于對适銷性、适合用于特殊用途及不侵權的所有(yǒu)明(míng)示或默示保證）或賣方産品會(huì)達到任何特定結果或不會(huì)被中斷或不會(huì)有(yǒu)錯誤的保證。
五． 責任限制(zhì)：在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方不對以任何方式由本合同、賣方産品或使用賣方産品引起的或與此有(yǒu)關的任何利潤或收入損失或其他後果性損失、随附性損失、特殊損失、懲罰性損失或任何其他間(jiān)接損失或損害承擔責任。在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方的最高(gāo)賠償限額為(wèi)買方就所涉及的賣方産品實際支付給賣方的價格。
六． 如賣方因不可(kě)抗拒力原因無法供貨，賣方将及時(shí)通(tōng)知買方，雙方将視(shì)情況決定部分不履行(xíng)、全部不履行(xíng)或延期履行(xíng)；如供貨期限屆滿日為(wèi)國內(nèi)外重大(dà)節日或國家(jiā)法定假日，則供貨期限順延；若因缺貨導緻延期交貨或無法供貨，賣方将及時(shí)告知買方，并不視(shì)為(wèi)賣方違約。不可(kě)抗力：因火(huǒ)災、洪水(shuǐ)、風暴、爆炸、恐怖事件、戰争、政府行(xíng)為(wèi)或任何其他賣方無法預見、無法避免和(hé)無法克服的事件造成延期交貨或無法交貨的，賣方不承擔任何責任。
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（2）常規試劑采用快遞，運費以顯示為(wèi)準。
（3）大(dà)物件一般默認發德邦物流，運費需聯系客服計(jì)算(suàn)。
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三． 質量責任：我司保證所供産品質量與随貨COA所列标準相符。買方應以産品制(zhì)造商的标準作(zuò)為(wèi)驗收标準。鑒于化學品的特殊性，賣方對未使用之前的産品質量負責，對化學品的應用不負有(yǒu)任何直接與間(jiān)接的責任。賣方提醒買方：在做(zuò)實驗之前，預先按照技(jì)術(shù)規範檢驗産品質量。在産品開(kāi)始使用之後，買方對應用及其結果負有(yǒu)全部責任。若有(yǒu)質量異議，買方需在收到貨物後10個(gè)工作(zuò)日內(nèi)書(shū)面通(tōng)知賣方，過期無效。
四． 有(yǒu)限保證：在适用法律允許的最大(dà)限度內(nèi)，賣方提供的産品均“按現狀條件”提供給買方，賣方不作(zuò)對産品和(hé)/或其使用的各種明(míng)示或默示的保證（包括但(dàn)不限于對适銷性、适合用于特殊用途及不侵權的所有(yǒu)明(míng)示或默示保證）或賣方産品會(huì)達到任何特定結果或不會(huì)被中斷或不會(huì)有(yǒu)錯誤的保證。
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六． 如賣方因不可(kě)抗拒力原因無法供貨，賣方将及時(shí)通(tōng)知買方，雙方将視(shì)情況決定部分不履行(xíng)、全部不履行(xíng)或延期履行(xíng)；如供貨期限屆滿日為(wèi)國內(nèi)外重大(dà)節日或國家(jiā)法定假日，則供貨期限順延；若因缺貨導緻延期交貨或無法供貨，賣方将及時(shí)告知買方，并不視(shì)為(wèi)賣方違約。不可(kě)抗力：因火(huǒ)災、洪水(shuǐ)、風暴、爆炸、恐怖事件、戰争、政府行(xíng)為(wèi)或任何其他賣方無法預見、無法避免和(hé)無法克服的事件造成延期交貨或無法交貨的，賣方不承擔任何責任。
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